체외수정시술에 적용하기 위한 효과적인 보조부화술에 관한 연구 = A study on Effective Assisted Hatching in IVF-ET program

• 저자 : 박성백
• 형태사항 : x, 102 ; 26 cm

• 일반주기 :

  지도교수: 서 병 부

• 학위논문사항 : 학위논문(박사)-- 대구대학교 : 자연자원학과 축산학전공 2014. 2
• KDC : 520
• 발행국 : 경상북도
• 언어 : 한국어
• 출판년 : 2014
• 주제어 : Assisted hatching, IVF-ET, mouse embryo, vitrification

본 연구는 체외수정시술의 배아의 효과적인 보조부화술을 확립하기 위해 1) 다양한 보조부화술이 생쥐 2 세포기 배발달율과 세포수에 미치는 영향, 2) 유리화동결 전·후에 시행한 레이저 보조부화술과 인공수축이 생쥐 포배기 배아의 부화율과 세포수에 미치는 영향, 3) 인간의 체외수정시술에 시행한 보조부화술이 임신율과 착상율에 미치는 영향을 검토하고자 실시하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다.

1. 다양한 보조부화술이 생쥐 2 세포기 배발달율과 세포수에 미치는 영향 생쥐 2 세포기 배아를 회수하여 micropipette을 이용한 2가지 보조부화술과 레이저를 이용한 3가지 보조부화술을 시행하여 배발달율과 세포수 형성에 미치는 영향을 조사한 결과, 레이저를 이용한 qLAH와 qLZT-AH의 부화 진행 배반포 형성율이 높게 나타났으며, 영양막세포수 및 총 세포수 형성에는 qLAH를 이용한 보조부화술이 효과적인 방법으로 생각된다.

2. 유리화동결 전·후에 시행한 레이저 보조부화술과 인공수축이 생쥐 포배기 배아의 부화율과 세포수에 미치는 영향 생쥐 2 세포기 배아를 회수하여 48시간 배양 후 부화가 시작되지 않은 배반포를 유리화동결 전·후에 레이저 보조부화술을 시행하여 부화 진행 및 부화 배반포 형성율과 세포수 형성에 미치는 영향을 조사한 결과, 생존율에는 차이가 없었으나 48시간 배양 후 부화 진행 및 부화 배반포 형성율은 보조부화술을 시행하지 않은 군보다 전·후로 시행한 군에서 높게 나타났으며, 영양막세포수 및 총 세포수 형성율 또한 보조부화술을 전·후로 시행한 군에서 높게 나타났다. 인공수축을 시행한 군과의 비교에서는 인공수축과 보조부화술을 시행한 군이 하지 않은 군보다 높은 부화 진행 및 부화 배반포 형성율을 나타내어 배반포의 유리화동결에서 보조부화술이 효과적인 방법으로 생각된다.

3. 인간의 체외수정시술에서 micropipette을 이용한 기계적 보조부화 술이 임신율과 착상율에 미치는 영향 나이가 많은 환자군, 반복적 체외수정시술 환자군 그리고 수정된 배아의 질이 낮거나, 배발달 과정 중 배아의 등급이 낮아 1등급 배아를 이식하지 못한 환자군을 대상으로하여 보조생식술을 시행한 군과 시행하지 않은 군의 임신율과 착상율을 조사한 결과, 보조부화술을 시행한 군에서 임신율이 높은 경향을 보였으나 유의차는 나타나지 않았다.

이상의 결과로, 생쥐 2 세포기 배아에 효과적인 보조부화술은 레이저를 이용하여 넓은 부위의 투명대를 제거하는 것이 부화 진행 및 부화 배반포 형성율과 영양막 및 전체 세포수 형성에 효과적이고, 포배기 배아의 유리화 동결에서도 레이저를 이용한 보조부화술이 부화 진행 및 부화 배반포 형성율과 영양막 및 전체 세포수 형성에 효과적이었다. 그리고 인간의 체외수정시술 프로그램에서 시행한 기계적 보조부화술 유무는 임신율과 착상율에 영향을 미치지 않았다. 이러한 동물실험결과를 바탕으로 인간의 체외수정시술 프로그램에 적용할 수 있도록 보조부화술의 종류와 제거해야할 투명대의 범위에 대한 추가적인 연구가 필요하다고 생각된다.

제 1 장. 종합 서론 1

제 2 장. 다양한 보조부화술이 생쥐 2 세포기 배발달율과 세포수에 미치는 영향 10

Ⅰ. 서론 11

Ⅱ. 재료 및 방법 14

   1. 배아의 준비 14

      1) 실험동물 14

      2) 2 세포기 배아의 회수 14

      3) 2 세포기 배아의 배양 14

   2. Micropipette을 이용한 보조부화술 16

      1) 배양액 준비 16

      2) Micropipette의 준비 16

      3) 단일 기계적 보조부화술 16

      4) 교차 기계적 보조부화술 16

   3. 레이저를 이용한 보조부화술 17

      1) 배양액 준비 17

      2) 레이저 보조부화 장비 17

      3) 단일 레이저 보조부화술 17

      4) 1/4 천공하는 레이저 보조부화술 17

      5) 1/4 얇게하는 레이저 보조부화술 18

   4. 배반포의 이중형광염색 18

   5. 조사항목 23

      1) 생쥐 2 세포기 배아에 시행한 다양한 보조부화술이 생쥐 배발달에 미치는 영향 23

      2) 생쥐 2 세포기 배아를 다양한 보조부화술을 시행하여 발달된 포배기 배아의 세포수 비교 23

   6. 통계분석 23

Ⅲ. 결과 24

   1. 생쥐 2 세포기 배아에 시행한 다양한 보조부화술이 생쥐 배발달에 미치는 영향 24

   2. 생쥐 2 세포기 배아를 다양한 보조부화술을 시행하여 발달된 포배기 배아의 세포수 비교 26

Ⅳ. 고찰 28

Ⅴ. 적요 33

제 3 장. 유리화동결 전후에 시행한 레이저 보조부화술과 인공 수축이 생쥐 포배기 배아의 부화율과 세포수에 미치는 영향 35

Ⅰ. 서론 36

Ⅱ. 재료 및 방법 40

   1. 배아의 준비 40

      1) 실험동물 40

      2) 포배기 배아의 준비 40

   2. 레이저 보조부화술과 인공수축 40

      1) 배양액 준비 40

      2) 레이저 보조부화 장비 40

      3) 레이저 보조부화술 40

      4) 인공수축을 위한 micropipette 준비 40

      5) 인공수축 42

   3. 유리화동결 42

      1) 동결액과 융해액의 제조 42

      2) 동결보존 용기 42

      3) 유리화동결 44

      4) 융해 44

   4. 배반포의 이중형광염색 44

   5. 조사항목 44

      1) 레이저 보조부화술이 유리화동결-융해 배반포의 부화율에 미치는 영향 44

      2) 레이저 보조부화술이 유리화동결-융해 배반포의 세포수에 미치는 영향 44

      3) 인공수축과 레이저 보조부화술이 생쥐 배반포의 유리화동결에 미치는 영향 47

   6. 통계분석 47

Ⅲ. 결과 48

   1. 레이저 보조부화술이 유리화동결-융해 배반포의 부화율에 미치는 영향 48

   2. 레이저 보조부화술이 유리화동결-융해 배반포의 세포수에 미치는 영향 50

   3. 생쥐 포배기 배아의 유리화동결에서 인공수축과 레이저 보조부화술이 부화율에 미치는 영향 53

Ⅳ. 고찰 55

Ⅴ. 적요 59

제 4 장. 인간의 체외수정시술에서 micropipette을 이용한 기계적 보조부화술이 임신율과 착상율에 미치는 영향 61

Ⅰ. 서론 62

Ⅱ. 연구대상 및 방법 64

   1. 연구대상 64

   2. 과배란 유도 및 난자채취 64

      1) 장기요법 64

      2) 단기요법 64

      3) 길항요법 64

      4) 배양액 64

      5) 수정 및 배아의 배양 65

   3. 보조부화술 65

      1) 배양액 준비 65

      2) Micropipette의 준비 65

      3) 기계적 보조부화술 65

   4. 조사항목 66

   5. 통계분석 66

Ⅲ. 결과 69

Ⅳ. 고찰 74

Ⅴ. 적요 79

참고문헌 81

Abstract 94