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| 발행년 : | 2015 |
|---|---|
| 구분 : | 학위논문 |
| 학술지명 : | |
| 관련링크 : | http://www.riss.kr/link?id=T13697310 |
http://www.riss.kr/link?id=T13697310
- 기타서명
Characterization of pluripotent cell lines derived from various embryonic origins in pigs
- 저자
김은혜
- 형태사항
iv, 49 p. : 삽화, 표 ; 26 cm.
- 일반주기
충북대학교 논문은 저작권에 의해 보호됩니다
지도교수: 현상환
참고문헌: p.41-47 - 학위논문사항
학위논문(석사)-- 충북대학교 대학원 : 수의학과(수의기능학) 2015. 2
- KDC
528.1 5
- 발행국
충청북도
- 언어
영어
- 출판년
2015
초록 (Abstract)
- 돼지 배아줄기세포의 확립은 신체를 구성하고 있는 모든 종류의 세포로 분화할 수 있다는 특성을 응용하여 형질전환체 개발, 신약개발, 질환모델 개발 등에 응용될 수 있다. 그러나 아직까지 진정한 돼지 배아줄기세포는 확립된 바 없다. 본 연구에서는 체외수정, 단위발생, 유도만능줄기세포를 공여핵원으로 이용한 핵이식과 같은 다양한 기원의 돼지 배아로부터 총 7 가지 돼지 배아줄기세포주를 확립하고 이를 비교분석 하였다.
돼지 배아줄기세포를 유지하는 동안 정상적인 콜로니와 구별되는 변형된 콜로니를 발견하였다. 변형된 콜로니를 구성하는 세포의 종류는 정상 콜로니를 구성하는 빠르게 자가분열하는 꽃잎모양의 세포뿐만 아니라 크고 납작한 세포와 작고 방추모양의 세포가 혼재된 양상이었다. 기원별 돼지 배아줄기세포의 특성을 비교 분석하고 만능성 수준을 검증하기 위해 알칼라인 포스파타아제 활성, 미분화 마커 (Oct4, Sox2, Nanog)의 발현을 확인하였다. 더불어, 프라임드 특징중의 하나인 FGF2 시그널과 관련된 유전자의 발현을 확인했으며, 배아체형성능 및 삼배엽 분화능을 다양한 마커 (AFP, cytokeratin 17, DESMIN, Vimentin, CRABP2)를 통해 검증하였고. 모든 세포주가 정상핵형을 보였다.
- Ⅰ. INTRODUCTION 1
- Ⅱ. MATERIALS AND METHODS 3
- 1. Chemicals 3
- 2. Oocyte collection and in vitro maturation (IVM) 3
- 3. In vitro fertilization (IVF) 4
- 4. Parthenogenetic activation (PA) of oocytes 5
- 5. Nuclear transfer (NT), fusion, and activation 5
- 6. Preparation of mouse embryonic fibroblasts (MEFs) as the feeder cell layer 6
- 7. Derivation and culture of putative porcine ESC lines 6
- 8. Cell population-doubling time 7
- 9. Gene expression analysis of putative porcine ESCs and embryoid bodies by real-time PCR or reverse transcriptase PCR 7
- 10. Alkaline phosphatase (AP) activity detection and in vitro differentiation 12
- 11. Immunofluorescence (IF) analysis 12
- 12. Karyotyping 13
- 13. Transmission electron microscopy (TEM) and mitochondrial measurements 13
- 14. Statistical analysis 14
- Ⅲ. RESULTS 15
- 1. Generation of primed porcine ESC lines from different origins 15
- 2. Proliferation and colony classification of porcine ESCs during maintenance 19
- 3. Comparative expression analysis of key genes and proteins involved in the pluripotency of porcine ESCs 24
- 4. Karyotyping analysis and epigenetic characteristics of porcine ESC lines 28
- 5. Mitochondria morphology analysis of porcine ESCs 31
- 6. Differentiation potential analysis of porcine ESCs 33
- Ⅳ. DISCUSSION 35
- Ⅴ. REFERENCES 41
- SUMMARY IN KOREAN 48
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