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The Generation of Genetically Modified Cat by Using a CRISPR/Cas9 System / 하아나

15 유전학 조회 수 137 추천 수 0 2017.02.14 14:13:45
nibp *.223.3.98
발행년 : 2016 
구분 : 학위논문 
학술지명 :  
관련링크 : http://www.riss.kr/link?id=T14051237 

The Generation of Genetically Modified Cat by Using a CRISPR/Cas9 System

= CRISPR/Cas9 시스템을 이용한 고양이의 변형된 유전자 발생

                                 

  • 저자

    하아나                                       

  • 형태사항

    xi, 76 p. ; 26 cm

  • 일반주기

    지도교수: 공일근

  • 학위논문사항

    Thesis(doctoral)-- 경상대학교 대학원 : 응용생명과학부 응용생명과학 2016. 2

  • 발행국

    대한민국

  • 언어

    영어

  • 출판년

    2016

초록 (Abstract)

  • 초 록 1987년 일본학자인 Yoshizumi Ishino에 의해 대장균에서 CRISPR가 발견된 이래 DNA를 절단하는 핵산분해효소 (Nuclease)인 Cas9과 결합이 해서 만들어진 CRISPR/Cas9 시스템을 이용하여 새로운 방식으...
  • 초 록 1987년 일본학자인 Yoshizumi Ishino에 의해 대장균에서 CRISPR가 발견된 이래 DNA를 절단하는 핵산분해효소 (Nuclease)인 Cas9과 결합이 해서 만들어진 CRISPR/Cas9 시스템을 이용하여 새로운 방식으로 다양한 형질전환동물을 생산하게 되었다. 이는 흔히 유전자 가위라 불리는 endonuclease splicing 로서 1세대인 Zinc-Finger Nucleases (ZFNs)로부터, 2세대인 Transcription Activator-like Effector Nucleases (TALENs)보다 효율적이고 손쉽게 유전자를 조작할 수 있는 이점이 있다. 이러한 CRISPR/Cas9 시스템은 특정 유전자 내에 target site와 동일한 sgRNA의 유도에 의해 Cas9의 특정 유전자 내 target site를 공격하여 유전자 삽입과 손실을 일으켜 유전자의 기능을 무력화하는 원리로 작동을 한다. 만약 염색체내 특정 부분의 유전자를 인위적으로 삽입, 손실, 변형 등을 유도할 수 있다면 유전학 및 분자 생물학 연구에 널리 활용할 수 있다.

목차 (Table of Contents)

  • Ⅰ. Introduction 4
  • Ⅱ. Material and Methods 11
  • 2-1. Chemicals 11
  • 2-2. Animals 11
  • 2-3. Oocyte collection and in vitro maturation 11
  • 2-4. Semen collection and cryopreservation 15
  • 2-5. In vitro fertilization 15
  • 2-6. Karyotyping of in vitro produced blastocyst 16
  • 2-7. Cat ear fibroblast cell culture 16
  • 2-8. Genomic DNA isolation from CEFC 17
  • 2-9. Polymerase Chain Reaction for fA3H/fA3CH 18
  • 2-10. TA cloning of PCR product of fA3h/fA3CH 21
  • 2-11. Construction of fA3H/fA3CH sgRNA/Cas9 plasmid 21
  • 2-12. Transcription of sgRNA and Cas9 mRNA in vitro for microinjectio 24
  • 2-13. Cat ear fibroblast cell transfection 26
  • 2-14. Microinjection of mRNA in zygotes 26
  • 2-15. Embryo transfer, pregnancy test, parturition, and photography 28
  • 2-16. Polymerase Chain ReactionRestriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) 28
  • 2-17. TA cloning and sequencing analysis 30
  • Ⅲ. Results 31
  • 3-1. Oocyte recovery, in vitro maturation, semen collection and in vitro fertilization 31
  • 3-2. Karyotyping analysis 34
  • 3-3. Establishment of pX330-fA3H/fA3CH vector and in vitro transcription 36
  • 3-4. Transfection of pX330-fA3H/fA3CH vector and fA3H/fA3CH sgRNA and Cas9 mRNA into CEFC 41
  • 3-5. Injection of fA3H/fA3CH sgRNA and Cas9 mRNA into cytoplasm 43
  • 3-6. Implantation and delivery of fA3H/fA3CH sgRNA and Cas9 mRNA transfected embryo 48
  • 3-7. Genomic isolation and quantitation 51
  • 3-8. PCR-RFLP of the kitten 55
  • Ⅳ. Discussion 59
  • Ⅴ. References 62
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